细胞活性检测之XTT法操作步骤-技术前沿-资讯-生物在线

细胞活性检测之XTT法操作步骤

作者:上海启达生物科技有限公司 2023-11-16T00:00 (访问量:38962)

细胞活性检测除了CCK8和MTT外还有一个XTT检测方法哦!

细胞活性检测XTT法是一种检测细胞增殖和活性的方法。其检测原理是:XTT是一种与MTT类似的四唑氮衍生物,可被活细胞线粒体脱氢酶还原成水溶性的棕色甲肷产物。当XTT与电子耦合共同使用时,甲肷的生成量与细胞的增殖程度呈正相关。

在细胞活性检测实验中,将XTT试剂和电子偶联试剂按一定比例混合后,加入到待测细胞中,然后进行孵育。在孵育过程中,活细胞会将XTT试剂还原成甲肷产物,而死细胞则无法进行这种还原反应。通过检测甲肷产物的生成量,可以判断细胞的增殖程度和细胞活力。

使用XTT法进行细胞活性检测具有操作简便、灵敏度高、重复性好等优点。同时,该方法对细胞毒性低,适用于各类哺乳动物细胞活性的检测。

 

试剂与材料:

(1) XTT:用60℃预热培养液配制成6.6mmol/L,过滤除菌,现配现用; 

(2) 吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS):用PBS配制成220mmol/L,4℃避光保存20天; 

(3) XTT/PMS:XTT与PMS按1:1混合(临用时混合)。

 

XTT法操作步骤:

(1)刺激增殖反应,按照一定比例将XTT试剂与电子耦合试剂混合,加入到细胞培养液中,继续培养一定时间;

(2) 于终止培养前2h,每孔加入XTT/PMS 20μl,混匀后再培养2h; 

(3) 在酶标仪上450nm处测定光吸光度,参考波长为655nm。 

 

【结果分析】 

计算SI:SI=试验孔OD均值/对照孔OD均值 

 

XTT法操作注意事项:

(1)丝裂原的质量和活性是测定淋巴细胞增殖反应的关键因素。不同厂家的产品,质量、活性不同,其使用的最佳刺激量也不同,因而在实验前,应事先确定其最佳刺激量。 

(2) 检测T细胞增殖反应,丝裂原用PHA或ConA;B细胞增殖反应用LPS或SPA;T、B细胞增殖反应则用PWM。 

(3) 增殖反应的细胞应保持高活性,一般应≥95%。应用单抗分离制备的反应细胞因保存剂(如NaN3)或抗体的直接作用可抑制细胞的增殖。此外,增殖细胞的浓度过高或过低均不利于细胞生长。 

(4) 细胞培养液应无菌、无支原体污染,特别是小牛血清应加热灭活补体,避免LPS或其他能促进细胞增殖物的污染。因此,实验前应选择本底低的小牛血清。用人"AB"型血清或自体血清也应加热灭活补体。

上海启达生物科技有限公司 商家主页

地 址: The third build,No.101 West Youyi road ,BaoShan area ,ShangHai,China

联系人: 温女士

电 话: 13012892256

传 真: 021-56800119

Email:info@ldraft.com

相关咨询

培养细胞的6大误区(二) (2024-11-21T00:00 浏览数:1012)

细胞培养的6大误区(一) (2024-11-15T00:00 浏览数:5033)

预购双十一大促 (2024-11-08T00:00 浏览数:4717)

一招搞定细胞的共培养 (2024-10-25T00:00 浏览数:7799)

轻松搞定类器官免疫荧光染色 (2024-10-18T00:00 浏览数:9487)

那些年消化类器官踩的坑 (2024-10-12T00:00 浏览数:8662)

悬浮细胞培养手则 (2024-09-23T00:00 浏览数:14033)

无血清细胞培养添加剂,您在使用哪些呢? (2024-09-13T00:00 浏览数:9718)

开学促销来啦,捋起袖子薅起来! (2024-09-03T00:00 浏览数:11305)

杂交瘤细胞的1.2.3.4 (2024-08-22T00:00 浏览数:18664)

ADVERTISEMENT