针对皮肤组织的构成特点，我们采用DNase I和其他类型胶原酶配置特定的混合酶液对组织进行解离，消化前后结合GentleMacs仪器进行研磨，通过机械辅助降低角质层细胞比例；皮肤样本细胞悬液制备中容易出现结团率偏高的情况，我们利用结团细胞团和单个细胞间沉降系数差进行离心沉降，辅助解离，降低结团率；对于碎片较多的样本，可通过活细胞染色流式分选来去除碎片和死细胞，获得总数多、活性好、碎片少、成团率低的单细胞悬液；同时，我们还可根据客户的具体需求，针对皮肤组织的特定类型细胞进行分选。
皮肤组织单细胞悬液制备
实验目的
客户提供新鲜组织样本（组织保护液保存），制备细胞悬液后用于单细胞测序。
实验准备
样本接收，拍照留存，超净台紫外消毒、备好冰盒冰板，准备好相应酶液。
【酶液】：
1 mg/ml Collagenase IV
3.5 mg/ml Collagenase II
0.04 mg/ml DNase I
0.002 mg/ml hyaluronidase
HBSS
实验步骤
1. 将组织放入培养皿中，放置在冰板上，加入清洗液，清洗三次；
2. 完全弃去清洗液后，加入少量配制好的酶液，使用干净的剪刀将组织完全剪碎；
3.待组织完全剪碎后，用移液器将每组剪碎的组织移到15mL离心管内，加入足量酶液混匀，取20μl进行台盼蓝镜检；
4.将装有组织的离心管放置在37oC摇床上消化60min；
5.待消化结束，将所有消化液转移至离心管，加入足量清洗液，将其通过100μm, 40μm滤网转移至离心管，300×g 离心5min；
6. 加入清洗液，300×g 离心5min；
7. 弃去上清，加入红细胞裂解液重悬裂解红细胞，裂解时间3min；
8. 加入清洗液终止裂解并清洗细胞，300×g 离心5min；
9. 弃上清,加入清洗液继续清洗一次后重悬，取20μl悬液进行质检；
10.将细胞加到37% percoll上，400×g，20min,升降速度为1，离心；
11.弃上清，使用清洗液重悬细胞，分别取20μl进行台盼蓝染色和AOPI计数。
部分实验结果展示
样本：小鼠皮肤组织
细胞活率：98.8%
活细胞浓度：3.6E+05/ml
结团率：4.37%
样本：人黑色素瘤
细胞活率：93.27%
活细胞浓度：2.98E+04/ml
结团率：12.47 %