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酶免疫电泳技术

作者:上海研谨生物科技有限公司 2011-08-30T00:00 (访问量:5607)

酶免疫电泳技术

一,酶免疫电泳技术的原理

抗原与抗体在琼脂糖凝胶中电泳时,在碱性缓冲液的条件下,抗原带负电,向正极移动。不同分子量或还不同电荷的抗原,在相同条件下,移动距离不等。这些在不同部位的抗原,再与相关抗体经扩散形成免疫沉淀线。酶免疫电泳技术中的抗原与抗体就是酶和它的相应抗体球蛋白。酶抗原与酶抗体形成的免疫复合物是用底物显色的,由于酶反应的高度灵敏性,使酶免疫电泳技术成为一项灵敏度高的检测技术,但仅局限于酶蛋白的分析鉴定。

二,辣根过氧化物酶(HRP)免疫电泳技术的程序

1, 器材与设备

电泳仪(包括电泳槽);温箱;载玻片(7.5cm×2.5cm;小玻棒(长4cm左右,直径约1.5mm);打孔器;铺有湿纱布的带盖搪瓷盒。

2, 材料与试剂

感染病毒的植物病叶,健株叶片作对照;辣根过氧化物酶(精制)制备的兔抗酶抗体;琼脂糖;0.1mol/pH8.6巴比妥钠盐酸缓冲液;底物与供氢体混合液(H2O2DAB-4HC1.

3,实验程序

1)将小玻棒放在洁净的载玻片中央,然后将3ml溶化的琼脂糖溶液(0.8g琼脂糖/100ml巴比妥钠盐酸缓冲液)浇制其上,待冷凝后,用针尖挑去玻棒,中央出现一穴槽。

2)在穴槽一端的两侧近边沿2mm处各打一小孔(直径23mm,在一孔穴中加入健株叶片汁液,在另一孔穴加入感染病毒的植株叶片汁液。

3)加汁液的孔穴一端接负极,电泳缓冲液仍是0.1mol/LpH8.6巴比妥钠盐酸缓冲液,电压150V,电泳1h.

4)在穴槽加入抗HRP兔血清,置于湿盒中,在37℃温箱中反应3h左右或室温过夜。

5)在生理盐水中浸洗34天,每天换水3次。

6) 敷上干净的湿滤纸,置于40℃烘箱内烘干。

7)浸入底物显色,从沉淀弧的形状,部位不同,比较健,病汁液所形成的沉淀线。

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