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293T你为什么不贴壁?

作者:南京森贝伽生物科技有限公司 2024-12-11T00:00 (访问量:537)

客户:“你们发的293T细胞到货全是飘的!”客户很生气,我们很无奈,可以看下图片对比:

 

为什么细胞到客户手上就飘起呢?

 

首先我们需要剖析这个细胞的特性。

1、消化方式:293T细胞是一个贴壁能力较弱的细胞,一般在传代过程中0.25%胰酶含edta常温消化30秒就可以全部消化下来了。

2、传代比例:这个细胞生长速度较快倍增时间一般是24小时左右,长得比较快,所以传代比例可以达到1:4左右。

3、生长特性:贴壁生长,随着细胞汇合度增加细胞会连片生长,当密度高于80%-90%细胞会由于生长空间受限成片飘起。所以需要仔细把握细胞生长密度。

4、培养体系:DMEM高糖+10% FBS+1% P/S

 

根据细胞的特性总结下来,293T细胞不贴壁的原因可能有以下几点:

 

1、细胞特性:293T细胞是一种贴壁依赖型细胞,但其贴壁能力较弱,容易在培养过程中脱落。这种特性使得在操作过程中需要特别小心,避免液体直接冲击细胞。

2、 培养条件:293T细胞对培养条件非常敏感,例如DMEM中碳酸氢钠浓度和培养箱中的CO2浓度需要严格控制。如果这些条件不适宜,可能导致细胞贴壁性变差。

3、血清批次差异:不同批次的胎牛血清(FBS)成分差异可能导致细胞贴壁性变差,建议使用相同批次的血清以减少这种影响。

4、 消化操作不当:胰酶消化时间过长或吹打动作过猛会导致细胞受伤,进而影响细胞的贴壁能力。建议控制消化时间和轻柔吹打,以达到80%的融合率。

5、空间隔离:当293T细胞从大瓶转移到小孔板时,由于空间隔离导致细胞自分泌或旁分泌产生的信号分子浓度降低,不利于细胞的贴壁或增殖。解决办法是在铺板前对孔板进行明胶包被处理。

6、传代次数过多:随着传代次数的增加,293T细胞的生长状态会逐渐下降,出现贴壁不牢的现象。因此,需要及时冻存细胞并保持实验的稳定性和持续性。

293T细胞不贴壁的原因可能涉及细胞特性、培养条件、血清批次差异、消化操作不当以及传代次数过多等多个方面。通过优化这些因素,可以改善293T细胞的贴壁性。

 

如何改善细胞到货不贴壁情况呢?

1、细胞到货后现在培养箱里稳定3-4小时,让细胞适应新的培养环境。

2、稳定后发现细胞还有大量飘起,建议将培养液全部收集起来离心收集细胞,打入原瓶静置培养,这一步操作时需要注意一下轻柔的将细胞吹散成单个细胞。

3、重铺静置培养一天后观察贴壁情况,将还没有贴上的细胞再换液时扔掉。

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