产品信息
 
产品名称
产品编号
规格
价格
2 × Frag/Prime Buffer
11377ES24
24 T
232
11377ES96
96 T
632
 
产品描述
 
本产品衔接Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit (Yeasen: Cat#12309)，替代其中的Frag/Prime buffer使用，用于RNA的片段化和一链cDNA合成步骤。Input RNA可以是total RNA，也可以是mRNA纯化的产物、rRNA去除的产物等。由于在Cat#12309中直接使用1×Frag/Prime Buffer去洗脱mRNA纯化或rRNA去除操作中所得的RNA，没有额外的体积用于添加含RNA的溶液。若Input RNA已经溶解于Nuclease free ddH2O中，可选择本产品进行RNA片段化或一链cDNA合成反应。
 
产品组分
 
组分编号
组分名称
8 T
24 T
96 T
11377-A
2 × Frag/Prime Buffer
68 μL
204 μL
816 μL
 
运输与保存方法
 
干冰运输。-20 °C存放，有效期一年。
 
注意事项
 
1. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。
2. Input RNA请溶于Nuclease free ddH2O，避免Mg2+的存在干扰片段化效果；Input RNA最大投入体积为8.5 μL，在进行洗脱时请注意洗脱体积的选择。
3. 本产品仅作科研用途！为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
 
使用方法
 
当Input RNA不需要片段化处理时，请选择方案A；当Input RNA需要片段化处理时，请选择方案B。
A1. 若Input RNA无需片段化处理，可结合Cat#12309试剂，按照表1直接配制第一链cDNA合成反应体系。
表1 直接进行第一链cDNA合成反应体系
名称
体积 (μL)
Input RNA
8.5
2×Frag/Prime Buffer
8.5
Strand Specificity Reagent
6
1st Strand Enzyme Mix
2
Total
25
A2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12309进行后续反应。

表2 第一链cDNA合成反应程序
温度
时间
热盖 105 °C
On
25 °C
10 min
42 °C
15 min
70 °C
15 min
4 °C
Hold
B1. 若Input RNA需要进行片段化处理，可按照3配制片段化体系进行RNA片段化。

表3 片段化反应体系
名称
体积 (μL)
Input RNA